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細胞凋亡檢測:多法探秘生命“謝幕”

更新時間:2025-06-22點擊次數(shù):57
  在生命科學的微觀世界里,細胞凋亡檢測對剖析疾病機理、研發(fā)藥物至關重要。諸多檢測方法各展其長,共同揭開凋亡神秘面紗。
  形態(tài)學觀察是基礎“視窗”。光學顯微鏡下,經特定染色(如吉姆薩染色),凋亡細胞體積縮小、核質濃縮,與周圍正常細胞形成鮮明對比;熒光顯微鏡利用霍echst等染料,讓凋亡細胞核亮起藍白熒光,呈致密塊狀或碎片狀,直觀呈現(xiàn)細胞形態(tài)異變,為初步判斷提供依據(jù)。電子顯微鏡則更進一步,超高倍放大下,清晰可見凋亡細胞膜出芽、氣泡狀結構,線粒體腫脹皺縮,從細微處洞察凋亡特征。
  生化檢測聚焦關鍵“分子信標”。DNA瓊脂糖凝膠電泳是經典手段,凋亡細胞內核酸內切酶激活,切割DNA形成180-200bp整數(shù)倍寡核苷酸片段,電泳后呈梯狀條帶,如同分子梯田,確鑿指示凋亡發(fā)生。TUNEL法借助末端脫氧核苷酸轉移酶,標記凋亡細胞斷裂DNA的3'-OH末端,顯色或熒光示蹤,高靈敏揪出凋亡“痕跡”,哪怕早期凋亡也無所遁形。
 

細胞凋亡檢測

 

  流式細胞術堪稱“高效安檢儀”。用AnnexinV-FITC/PI雙染試劑,AnnexinV可特異性結合凋亡細胞外翻的磷脂酰絲氨酸,F(xiàn)ITC熒光標記使其在流式圖中顯綠色,PI則進入壞死細胞染色質紅,依據(jù)雙色信號,精準區(qū)分活細胞、早期凋亡、晚期凋亡與壞死細胞,快速定量分析,每小時能處理數(shù)千個細胞,為大規(guī)模樣本研究“提速”。
  此外,Caspase活性檢測直擊凋亡“執(zhí)行蛋白”。通過比色法、熒光法測定Caspase家族成員活性,因凋亡時這些關鍵酶被激活,催化底物顯色或發(fā)熒光,反映凋亡進程程度。
  從形態(tài)甄別到分子追蹤、蛋白活性洞察,細胞凋亡檢測方法多元互補,科研者“多管齊下”,方能精準洞悉細胞凋亡奧秘,推動生命科學邁向新程。
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