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原代細胞培養的注意事項

更新時間:2024-11-17點擊次數:184
  原代細胞培養的注意事項主要包括以下幾個方面:
  
  1、取材與處理:
  
  選擇健康、無感染的組織或器官作為細胞來源,以確保獲得高質量的原代細胞。取材操作要迅速,盡量減少組織在空氣中暴露的時間,避免污染和細胞損傷。例如,對于孕鼠取材,浸泡乙醇時間應控制在1分鐘左右,不能過長,以確保胚胎細胞活性。
  
  2、無菌操作:
  
  整個取材和培養過程都要嚴格進行無菌操作,操作要求應高于外科手術標準。使用經過滅菌的工具和試劑,實驗者離開超凈臺時,要隨時用肘部關閉工作窗。
  
  3、消化與分離:
  
  如果采用酶消化法,要根據組織特性選擇合適的消化酶(如膠原酶、胰酶等),并控制好消化時間和溫度。例如,胰酶的溫度應低于37℃,濃度只需平時消化細胞濃度的一半,以避免細胞被過度消化而受損。組織塊法中,組織塊剪碎后接種到培養瓶壁上,要注意組織塊的粘附情況,避免組織塊漂浮起來影響細胞生長。
  

原代細胞培養

 

  4、培養條件:
  
  提供適宜的培養條件,包括溫度、濕度、氧氣濃度、營養物質等。一般來說,動物細胞培養的適宜溫度為36.5℃±0.2℃,二氧化碳濃度為5%,相對飽和濕度為95%。培養液的選擇要根據不同的細胞類型和實驗要求進行。常用的有L/HDMEM、F12DMEM、RPMI1640等。
  
  5、觀察與換液:
  
  定期觀察細胞的生長狀況,包括細胞形態、貼壁情況、是否有污染等。原代細胞在培養2天后可能會出現細胞液變黃的現象,這是正常現象,是由于細胞在貼壁生長過程中釋放CO2和其他物質導致培養液PH發生改變。根據細胞的生長情況及時換液,一般48~72小時可換液一次。換液時要注意去除漂浮的組織塊和殘留的血細胞。
  
  6、傳代與凍存:
  
  原代細胞的傳代次數不宜過多,一般不超過3-5次,否則會導致細胞老化和突變。當細胞生長至80%~90%融合時,可以進行傳代或凍存。凍存液的配制要根據具體的細胞類型和實驗室的經驗來確定,常見的配方有10%DMSO+90%胎牛血清等。
  
  7、細胞鑒定:
  
  有時候獲取的原代細胞可能不是期望的細胞類型,需要進行細胞鑒定。可以通過購買特定的細胞表面標志物抗體或染色試劑來進行鑒定。
  
  原代細胞培養需要注意細胞的來源、處理、無菌操作、消化與分離、培養條件、觀察與換液、傳代與凍存以及細胞鑒定等方面。只有嚴格遵守這些注意事項,才能保證原代細胞培養的成功和細胞的質量。
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